上次有讀者給小編留言，說自己的實(shí)驗室想買一臺qPCR儀，由于價格不菲，就怕買錯了對以后的實(shí)驗和經(jīng)費(fèi)都帶來麻煩。這里小編要說一句，好的產(chǎn)品越用越順心，差的產(chǎn)品越用越糟心。那么今天小編就和大家介紹一下一臺出色的qPCR儀需要具備哪些特點(diǎn)呢。

    無論是選擇國產(chǎn)還是進(jìn)口的qPCR儀，首先要從儀器光學(xué)檢測的技術(shù)方案來著手，因為這是qPCR 儀的核心技術(shù)，它決定了實(shí)驗的準(zhǔn)確性、可靠性和重復(fù)性。

    目前來看，頂部檢測CCD技術(shù)是定量PCR儀的蕞佳技術(shù)方案。國內(nèi)頂尖qPCR儀和國外主流qPCR儀都采用這種技術(shù)，比如美國Thermofisher的Q5/7500，ROCHE的LC480/96，BIORAD的CFX96，以及德國JENA的qTOWER，國內(nèi)有朗基的Q1000/Q2000系列產(chǎn)品。這種頂部檢測技術(shù)采用相機(jī)原理，直接從PCR管的上方對樣品進(jìn)行實(shí)時檢測，采光面平行性好，采光面積大，因此小體積反應(yīng)液都能放心使用（如圖1）。

    眾所周知，采用頂部檢測技術(shù)的 qPCR儀所需要的反應(yīng)體積只需5-10ul即可，（而其他檢測方案的qPCR儀至少需要20ul以上），從而很大程度地降低了實(shí)驗成本。實(shí)驗達(dá)人們蕞清楚qPCR試劑有多貴了，能省一半的試劑就是省下大把的銀子啊。

圖1  10ul，2倍稀釋4個重復(fù)

在Q2000上獲得的結(jié)果

    這里小編要告訴你一個獲得蕞佳結(jié)果的訣竅——就是改變習(xí)慣，使用白管。因為不透明的白管能屏蔽背景噪音，即使樣品井有點(diǎn)臟都沒有關(guān)系。另外，白管還能減少光的折射損失，信噪比和靈敏度更高，因此可獲得比透明管更佳的實(shí)驗效果。頂部檢測CCD方案絕配白管，可實(shí)現(xiàn)1+1>2的優(yōu)勢。

圖2  qPCR專用0.1白管

     另外，0.1ml管由于光程比0.2ml管更短，因而熒光信號更穩(wěn)定，靈敏度更高（可點(diǎn)擊查看：干貨 | 為什么qPCR高手都愛用0.1ml管？）。國內(nèi)PCR儀朗基科儀就是采用SSLP短光程靜態(tài)熒光CCD成像技術(shù)，巧妙地將頂部檢測的光程縮小到100mm（而羅氏LC480的光程達(dá)到800mm），既可使用白管，又適用0.1ml管。這項創(chuàng)新技術(shù)使得朗基Q2000型96孔熒光定量PCR儀的體積更是做到了進(jìn)口同類產(chǎn)品的一半甚至更小，大大節(jié)約了實(shí)驗室空間。

圖3   朗基Q1000 & Q2000熒光定量PCR儀

    無論是普通pcr儀還是熒光定量pcr儀，升降溫速率都決定了實(shí)驗所需的時間，當(dāng)然是越快越好咯。能快速達(dá)到目標(biāo)溫度，從而縮短實(shí)驗時間和提高工作效率肯定是一臺優(yōu)秀的qPCR儀應(yīng)具備的品質(zhì)。而對于PCR儀的變溫速率來說，每秒增加1度都是半導(dǎo)體技術(shù)的一次飛躍。

    儀器的通量，包括孔數(shù)和通道數(shù)。目前市場上有8孔、16孔、48孔、96孔，還有384孔，通道數(shù)有二通道、四通道、五通道和六通道可以選擇。那我們應(yīng)該怎么選呢？！

    買產(chǎn)品并不只為當(dāng)下需要，更多的要考慮未來，當(dāng)然是孔數(shù)越多越好，通道數(shù)越多越好。無論是科學(xué)研究還是疾病診斷，都會越來越多地使用高通量熒光定量PCR儀。需要注意的是，有些進(jìn)口廠家的儀器只對自家生產(chǎn)的多通道染料開放，所以有較大的局限性，選擇時需謹(jǐn)慎。